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尊龙凯时一直致力為神經科學研究、腫瘤研究、代謝研究等領域提供科研服務整體解決方案,包括質粒構建、病毒包裝、穩定株構建、細胞功能學實驗、動物疾病模型構建、外泌體研究等整體服務。
 
腫瘤整體課題(嚴謹真實、結果可靠)
1. 高通量基因篩選:用高通量測序、基因晶片和 CRISPR/Cas9 文庫進行關鍵基因篩選
真核轉錄組測序、外顯子組測序、基因表達譜晶片、miRNA 測序/晶片
m6A 甲基化測序、lncRNA 測序/晶片、單細胞轉錄組測序、iTRAQ 蛋白質組定量
 
Nat Commun. 2016 Apr 6;7:11215.
 
2. 基因調控:用病毒或質粒載體介導基因過表達、敲除或干擾,可以實現對基因表達的上調或下調。
  • 過表達質粒、干擾質粒、CRISPR/Cas9 質粒
  • 腺相關病毒(AAV)、慢病毒(LV)、腺病毒(ADV)、逆轉錄病毒(RV)
  •  

 

3. 細胞水平驗證:在細胞水平驗證基因的功能,包括細胞增殖、細胞遷移與侵襲、細胞凋亡、細胞周期等。


J Hepatol. 2018 Jun;68(6):1214-1227.
 

4. 動物體內實驗:通過構建動物模型檢測基因水平變化後引起的指標變化,包括皮下成瘤、原位成瘤、腫瘤大小、腫瘤轉移等。


J Hepatol. 2018 Jun;68(6):1214-1227.
 

5. 作用機制研究:進一步挖掘出與關鍵基因相關的信號通路或其它基因,包括雙螢光素酶檢測、RNA pull-down、BioID、CO-IP 等。


J Hepatol. 2018 Jun;68(6):1214-1227.

 
神經整體課題(團隊專業、服務完善)

1. 疾病模型構建:專業提供慢性痛、腦卒中、抑鬱、神經退行性疾病、癲癇等神經系統動物疾病模型的構建。


Cichon J et al.,Bio Protoc.2018;Proc Natl Acad Sci U S A. 2017 Jul 11;114(28):E5673-E5682.
 

2. 環路示蹤:藉助病毒載體的示蹤技術,可實現對全腦、核團、環路、細胞、單細胞及亞細胞器的標記,從複雜的神經環路到高解像度的單神經元形態,建立完善的示蹤體系。


Cell Stem Cell. 2020 Mar 5;26(3):331-345.e6.
 

3. 元件操控:通過病毒載體和腦定位注射技術可完成基因過表達、基因沉默、光遺傳學、化學遺傳學的精準特異性操控。


Science. 2018 Oct 26;362(6413):429-434.
 

4. 表型篩選及變化:從分子到細胞再到行為的一站式服務,包括 WB、qPCR、電生理、病理、免疫組化、行為學實驗。


 
m6A 甲基化課題(思路設計、服務完善)

1. 預實驗:找到與 RNA 甲基化相關的酶是否有差異表達或檢測整體 m6A 水平,用 qPCR、WB、組織晶片、質譜檢測等,再進行甲基化酶敲低、敲除和過表達細胞實驗和動物實驗。


Song H et al. Autophagy. 2019;Chen M. et al. (2018) Hepatology, 67(6): 2254
 

2. 通過 m6A-seq 測序,可以知道哪些基因在 RNA 甲基化修飾上有差異,再結合轉錄組測序,發現差異基因的表達水平變化。


Chen M. et al. (2018) Hepatology, 67(6): 2254
 

3. 獲得 RNA 甲基化修飾的目的基因後,再對 m6A 甲基化進行修復,觀察位點修復正常後對細胞表型和小鼠腫瘤及腫瘤大小的影響。


Huang H et al. Nat Cell Biol. 2018
 

4. 進一步挖掘甲基化酶通過哪些通路對目的基因進行調控或蛋白互作技術挖掘蛋白,包括蛋白與 DNA 或 RNA 互作、蛋白與蛋白互作、靶基因驗證等。


Chen M. et al. (2018) Hepatology, 67(6): 2254

 
外泌體研究課題(經驗豐富、質量可靠)
 

1. 外泌體分離:差速超速離心法可以獲得高質量、高純度的外泌體,因此被認為是分離方法中的「金標準」,也是高分文章中常用的分離方法。

 

2. 外泌體鑑定:常用的鑑定方法包括透射電鏡(TEM)、納米粒徑跟蹤分析(NTA)、Western Blot(WB)標誌物檢測等。


ACS Nano. 2019 Feb 26;13(2):2450-2462.
 

3. 高通量分析:外泌體內含有與細胞來源相關的核酸和蛋白質,可以傳遞 mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA、蛋白質等進入受體細胞,參與細胞間通訊。


Cell Commun Signal. 2019 Aug 16;17(1):96.
 

4. 外泌體示蹤:常用親脂性染料對外泌體進行標記,主要包括兩類,一是 PKH67(綠色)和 PKH26(紅色),二是 DiO(綠色)、DiI(橙色)和 DiR(深紅)。


Oncol Rep. 2012 Nov;28(5):1551-8;BMC Cancer. 2019 Oct 29;19(1):1015.
 

5. 體內外功能研究:將標記的外泌體與受體細胞共培養,觀察細胞功能變化,再將外泌體注射入動物模型中,觀察腫瘤大小、轉移,並檢測相關指標。


Nat Commun. 2018 Jan 15;9(1):191.
 
 

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