基因過表達
工具載體介紹
| 表達系統 | 真核表達載體 | 慢病毒載體 | 重組腺相關病毒載體 | 重組腺病毒載體 |
|---|---|---|---|---|
| 載體基因特性 | 雙鏈DNA質粒 | RNA逆轉錄病毒 | 單鏈DNA病毒 | 雙鏈DNA病毒 |
| 外源基因表達時間 | 24h開始表達，持續3-7天 | 2-4天開始表達，長時間穩定表達 | 7-14天開始表達 | 1-2天開始表達 |
| 插入片段大小 | 8kb左右 | 4kb左右 | 2.8kb左右 | 4kb左右 |
| 穩定細胞株篩選 | 難操作 | 可以 | 不可以 | 不可以，瞬時表達 |
| 細胞實驗 | 細胞系，部分轉染效率低 | 首選，廣譜，感染效率高 | 細胞系，部分血清型轉染效率低 | 廣譜，感染效率高 |
| 動物實驗 | 不適合 | 適合，根據觀察時間和注射部位 | 首選，根據觀察時間和注射部位 | 免疫原性高，慎選 |
| 滴度範圍 | 無 | 108~109TU/ml | 1012-1013VG/ml | 1010-1011PFU/ml |
載體圖譜中常見元件介紹
| 元件名稱 | 類型 | 用途 |
|---|---|---|
| 啟動子 | CMV、CAG、EF1a、U6等 | 廣譜或特異啟動目的基因的表達 |
| hSyn、CaMKIIα等 | 特異性啟動子，在特定的組織細胞中啟動目的基因的表達 | |
| 蛋白標籤 | 3xFLAG、HA 、6xHis、Myc等 | 與目的基因融合表達，常用於檢測外源蛋白表達水平 |
|
熒光標記 |
EGFP、mCherry、mNeonGreen等 |
可與目的基因融合或非融合表達用於檢測轉染、感染效果 |
| 抗性基因 |
Puro、Neo、Hygro、BSD等 |
真核抗性，常用於穩定株篩選 |
|
Amp、Kan |
原核抗性，常用於原核細菌培養，質粒擴增 |
|
| 連接元件 |
Linker |
用於連接兩個基因，融合表達時常用，可降低因融合表達對蛋白摺疊和功能的影響 |
| IRES、2A |
用於連接兩個基因，達到非融合表達的效果 |
|
| 其它元件 | WPRE | 增加目的基因的表達 |
載體選擇（部分）
| 載體類別 | 編號 | 載體元件 |
|---|---|---|
| 慢病毒過表達 |
GL127 |
pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPRE |
| GL121 |
pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPRE |
|
| GL107 |
pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE |
|
|
GL122 |
pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPRE |
|
|
GL124 |
pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE |
|
| 腺病毒過表達 | H225 |
pADV-mCMV-MCS-3xFLAG |
| H201 |
pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG |
|
| H213 |
pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP |
|
|
H204 |
pADV-mCMV-mCherry-HA |
|
| 腺相關病毒過表達 | AOV024 |
pAAV-CMV-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE |
| AOV025 |
pAAV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE |
|
| AOV064 |
pAAV-hSyn-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE |
|
| AOV065 |
AAV-hSyn-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE |
|
| H9429 |
pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA |
|
| H9525 |
pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA |
|
| H10881 |
pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA |
|
| H10886 |
pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA |
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