穩定細胞株構建

全國服務熱線400-151-5198 業務諮詢15800353038　　

外源基因在細胞中的表達可分為兩大類，一類是瞬時表達，外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達到高水平的表達，但通常只持續幾天；一類是穩定表達（構建穩轉株），外源DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因。

　　建立穩定細胞株，基本原理是將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉染到宿主細胞並整合到宿主染色體中，用載體中所含的抗性標誌進行篩選。最常用的真核表達載體的抗性篩選標誌物有新黴素（neomycin）、潮黴素（hygromycin）和嘌呤黴素(puromycin)，篩選得到可穩定表達目的蛋白、或穩定沉默特定基因的細胞株。

篩選方法

慢病毒感染篩選穩定細胞株
利用慢病毒整合表達特性來篩選穩定細胞株，該方法克服了傳統質粒挑單克隆方法周期久的弊端，可以在短時間內高效獲取穩定細胞株。

利用慢病毒製備穩定株優勢
（1）細胞適用種類廣泛，可用於各種哺乳動物細胞；
（2）構建穩轉株時間短，表達持續時間長；
（3）多種熒光標記和抗性基因可選，滿足觀測實驗要求。

HUVEC

HepG2

穩定細胞株分類

　　混合克隆穩定細胞株

　　混合克隆細胞系是基因轉染後直接用抗藥篩選得到的，篩選出的細胞都表達抗性基因和目的基因，但包含了各種不同的細胞克隆。不同克隆的目的基因整合位置和表達量均有所不同。

　　混合克隆細胞株篩選比較快速，費用較低。在需要構建的細胞株轉染效率高，目的基因表達效率高的情況下，單克隆細胞株最後得到的表達效果和混合克隆細胞株並沒有顯著差異，這時多克隆細胞篩選是理想的選擇。

　　單克隆穩定細胞株

　　單克隆細胞系是由含有穩定整合外源片段的單個細胞的擴增得到的細胞株，每個細胞的目的基因整合位置的表達量均高度一致，但可能丟失一些表型。單克隆細胞株篩選周期長，費用高。需要進行細胞亞定位實驗的細胞系，難感染的和表達率低的通常建議進行單克隆細胞篩選。

服務流程

目的基因名稱，種屬等信息
載體需求（抗性、熒光、便簽等）
目的細胞等信息
其它特殊需求
細胞預實驗
質粒構建表達檢測
慢病毒包裝與純化
穩定株篩選及鑑定
構建好的穩定株
穩定株構建說明書
構建的質粒，病毒等

已構建的穩定株列表（部分）

中文名稱	對應穩定株	對應培養條件	細胞來源
人腦星形膠質母細胞瘤	U-87 MG-luc-mNeonGreen-Puro	MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人膠質瘤細胞	U251-CMV-EGFP-Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人膀胱移行細胞癌細胞	T24-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人胰腺癌細胞系	SW 1990-EGFP-Puro	L-15+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人神經母細胞瘤細胞	SK-N-SH-EGFP-Puro	MEM+10%FBS+0.4ug/ml Puromycin	中科院
人乳腺癌細胞	SK-BR-3-EGFP-Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人子宮頸鱗癌細胞	SiHa-CMV-EGFP-Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
小鼠腦神經瘤細胞	Neuro-2a-EGFP-Puro	MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
小鼠腦神經瘤細胞	Neuro-2a-CMV-Puro	MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人乳腺癌細胞	MDA-MB-468-EGFP-Puro	L-15+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人乳腺癌細胞	MDA-MB-231-CMV-EGFP-Luc-Puro	L-15+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人乳腺癌細胞	MCF7-CMV-EGFP-Puro	MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
小鼠肺癌細胞	LLC-CMV-sfGFP-Luc-Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人慢性髓原白血病細胞	K-562-CMV-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人T淋巴細胞白血病細胞	Jurkat-CMV-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+0.5ug/ml Puromycin	中科院
人子宮內膜癌細胞	ishikawa-CMV-Puro	RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人肝癌細胞	HuH-7-CMV-sfGFP-Luc-Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人肝癌細胞	HuH-7-Luc Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人結腸癌細胞	HT-29-EGFP-Puro	McCoy’s 5A+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人肝癌細胞	Hep G2-CMV-EGFP-Luc-Puro	DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人肝癌細胞	Hep G2-CMV-Puro	DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人宮頸癌細胞	HeLa-EGFP-Puro	DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人宮頸癌細胞	HeLa-RFP-Puro	DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人結腸癌細胞	HCT 116-CMV-EGFP-Luc-Puro	McCoy’s 5A+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人咽鱗癌細胞	FaDu-CMV-EGFP-Puro	MEM+10%FBS+1ug/ml Puromycin	中科院
小鼠結腸癌細胞	CT26.WT-CMV-Luc-Puro	RPMI-1640+10%FBS+8ug/ml Puromycin	中科院
小鼠結腸癌細胞	CT26.WT-CMV-Puro	RPMI-1640+10%FBS+8ug/ml Puromycin	中科院
人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞	Caki-1-EGFP-Puro	DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
倉鼠腎成纖維細胞	BHK-21 [C-13]-CMV-Puro	MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人甲狀腺乳頭狀癌細胞	B-CPAP-CMV-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+1%NEAA+2ug/ml Puromycin	中科院
小鼠黑色素瘤細胞	B16-CMV-Puro	RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin	中科院
小鼠黑色素瘤細胞	B16-CMV-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin	中科院
人非小細胞肺癌細胞	A549-CMV-EGFP-Puro	F12K+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人非小細胞肺癌細胞	A549-luc-mNeonGreen-Puro	F12K+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
小鼠乳腺癌細胞	4T1-CMV-Luc-Puro	RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin	中科院
小鼠乳腺癌細胞	4T1-CMV-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin	中科院
人胃癌細胞	MKN-45-CBh-luc2-mNeonGreenA-Puro	RPMI-1640+20%FBS+2ug/ml Puromycin	協和
人肺腺癌細胞	NCI-H1975-CBh-luc2-mNeonGreenA-Puro	RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人結腸癌細胞	HCT116-CBh-luc2-mNeonGreenA-Puro	McCoy’s 5A+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院