病毒載體構建服務包含慢病毒、腺相關病毒、腺病毒和逆轉錄病毒載體等,構建內容包括基因過表達載體構建、基因定點突變表達載體構建、用於基因沉默的shRNA設計與構建、microRNA表達與封閉載體設計與構建、螢光素酶報告基因載體構建(UTR、啟動子及其它功能序列)以及Cre-LoxP系統和CRISPR/Cas9基因編輯工具載體設計與構建等,力求一站式解決基因功能研究中的基因上調和基因下調需求。
質粒優勢:
①表達時間快,導入細胞後約24小時可觀察到目的基因表達;
②構建技術簡單,成本低。
③尊龙凯时的過表達載體庫豐富,並且過表達的標記豐富
熒光標記:GFP、mCherry、CFP、BFP、EYFP、mNeonGreen、tdTomato、 mScarlet…
標籤標記: FLAG、 HA 、Myc、His tag…
抗性標記:Puro、Neo、Hygro、BSD…
局限性:
①轉染試劑具有細胞毒性,使用後影響細胞狀態;
②大部分細胞較難轉染,達不到基因操作目的;
③質粒不整合到細胞基因組,只能進行短時間的瞬時表達,無法進行觀察周期較長的實驗。
由於單純質粒存在一定的局限性,根據實驗需要需包成病毒進一步滿足不同實驗的需求。
不同表達載體的區別
表達系統 |
真核表達載體 |
慢病毒載體 |
重組腺相關病毒載體 |
重組腺病毒載體 |
載體基因特性 |
雙鏈DNA質粒 |
RNA逆轉錄病毒 |
單鏈DNA病毒 |
雙鏈DNA病毒 |
外源基因表達時間 |
24h開始表達,持續3-7天 |
2-4天開始表達,長時間穩定表達 |
7-14天開始表達 |
1-2天開始表達 |
插入片段大小 |
8kb左右 |
4kb左右 |
2.8kb左右 |
6kb左右 |
穩定細胞株篩選 |
難操作 |
可以 |
不可以 |
不可以,瞬時表達 |
細胞實驗 |
細胞系,部分轉染效率低 |
首選,廣譜,感染效率高 |
不適合 |
廣譜,感染效率高 |
動物實驗 |
不適合 |
適合,根據觀察時間和注射部位 |
首選,根據觀察時間和注射部位 |
免疫原性高,慎選 |
滴度範圍 |
無 |
108~109TU/ml |
1012-1013vg/ml |
1010-1011pfu/ml |