尊龙凯时-人生就是搏!

      AAV代碼
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      腺相關病毒代碼
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      質粒構建

      質粒構建

        尊龙凯时科研服務平台可為基因功能研究者提供前沿、全面、嚴謹的載體設計和載體構建服務,內容涵蓋普通真核表達載體、病毒載體等。
        
        病毒載體構建服務包含慢病毒、腺相關病毒、腺病毒和逆轉錄病毒載體等,構建內容包括基因過表達載體構建、基因定點突變表達載體構建、用於基因沉默的shRNA設計與構建、microRNA表達與封閉載體設計與構建、螢光素酶報告基因載體構建(UTR、啟動子及其它功能序列)以及Cre-LoxP系統和CRISPR/Cas9基因編輯工具載體設計與構建等,力求一站式解決基因功能研究中的基因上調和基因下調需求。
        質粒優勢:
        ①表達時間快,導入細胞後約24小時可觀察到目的基因表達;
        ②構建技術簡單,成本低。
        
        ③尊龙凯时的過表達載體庫豐富,並且過表達的標記豐富
        
        熒光標記:GFP、mCherry、CFP、BFP、EYFP、mNeonGreen、tdTomato、 mScarlet…
        
        標籤標記: FLAG、 HA 、Myc、His tag…
        
        抗性標記:Puro、Neo、Hygro、BSD…
        
        局限性:
        
        ①轉染試劑具有細胞毒性,使用後影響細胞狀態;
        
        ②大部分細胞較難轉染,達不到基因操作目的;
        
        ③質粒不整合到細胞基因組,只能進行短時間的瞬時表達,無法進行觀察周期較長的實驗。
        
        由於單純質粒存在一定的局限性,根據實驗需要需包成病毒進一步滿足不同實驗的需求。
        不同表達載體的區別
      表達系統 真核表達載體 慢病毒載體 重組腺相關病毒載體 重組腺病毒載體
      載體基因特性 雙鏈DNA質粒 RNA逆轉錄病毒 單鏈DNA病毒 雙鏈DNA病毒
      外源基因表達時間 24h開始表達,持續3-7天 2-4天開始表達,長時間穩定表達 7-14天開始表達 1-2天開始表達
      插入片段大小 8kb左右 4kb左右 2.8kb左右 6kb左右
      穩定細胞株篩選 難操作 可以 不可以 不可以,瞬時表達
      細胞實驗 細胞系,部分轉染效率低 首選,廣譜,感染效率高 不適合 廣譜,感染效率高
      動物實驗 不適合 適合,根據觀察時間和注射部位 首選,根據觀察時間和注射部位 免疫原性高,慎選
      滴度範圍 108~109TU/ml 1012-1013vg/ml 1010-1011pfu/ml

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