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腺病毒ADV

腺病毒ADV

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腺病毒（Adenovirus, ADV）是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒，具有廣泛的細胞和組織感染能力。感染過程劇烈，適於短時間內進行基因高表達的實驗，與其它病毒相比，腺病毒優勢在於插入片段較長，表達活性強。

　　體外應用時，腺病毒載體轉基因效率高（接近100%的轉導效率），且可轉導不同類型的細胞，對於大量難轉染細胞的基因遞送是一個很好的工具。但是，在體內應用時，由於腺病毒免疫原性強，感染劇烈，故常會引起動物局部組織炎症反應和機體免疫反應，對動物體徵和實驗結果的客觀性造成影響。

ADV包裝和侵染過程

腺病毒包裝與純化

　　腺病毒包裝骨架達質粒與穿梭質粒共轉染HEK-293細胞，待細胞出現CPE狀態後通過收集細胞上清和細胞裂解物，通過濃縮或氯化銫密度梯度離心純化病毒。 
　　CPE（Cytopathic Effect）：病毒對組織培養細胞侵染後產生的細胞變性，利用此種病變效應可進行病毒定量。
 

腺病毒滴度檢測

　　檢測方法：酶聯免疫法腺病毒滴度測定，根據計算感染後染成褐色的陽性細胞數，來計算病毒滴度。
       實驗原理：腺病毒感染的陽性細胞表達的衣殼蛋白被染成褐色。
       檢測方法：免疫顯色方法
       實驗原理：通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與待感染腺病毒樣品的細胞結合，再用HRP標記的二抗與一抗結合，經顯色液顯色，被感染的細胞變成褐色，根據陽性細胞數，來計算病毒滴度。

腺病毒載體優勢

       ① 表達快，腺病毒感染細胞後，1-2天即可表達
       ② 載體容量大，感染效率高，常用於感染難感染的細胞
       ③ 不整合到染色體中，無插入致突變性
       ④  具有嗜肝性，易於感染肝細胞，腺病毒的體內應用是用於感染肝臟
　   不過由於腺病毒免疫原性高，對某些對外源刺激敏感的動物模型和組織中易造成炎症，體內應用需謹慎。

不同病毒的生物學特性比較

載體選擇
　　尊龙凯时擁有豐富的腺病毒產品，用於操作編碼基因和非編碼基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。
       以下腺病毒載體可供您選擇：
調控方式 載體編號 載體名稱（載體元件順序） 真核抗性 熒光 啟動子 默認標籤 載體容量
過表達 H225 pADV-mCMV-MCS-3xFLAG N/A N/A mCMV 3FLAG >6kb
H201 pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
H213 pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
H221 pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
H204 pADV-mCMV-mCherry-HA N/A mCherry mCMV HA >5kb
H222 pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry N/A mCherry mCMV 3FLAG >5kb
H12588 pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG N/A mNeonGreen CMV 3FLAG >4kb
H12589 pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG N/A mScarlet CMV 3FLAG >4kb
circRNA過表達 H6946 pADV-CMV-S-circRNA N/A N/A CMV N/A >5kb
miRNA過表達 H216 pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
表達cre K0024  pADV-CMV-Cre N/A N/A CMV N/A N/A
干擾 DKD001 pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
DKD004 pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry N/A mCherry U6 N/A N/A
CRISPR敲除 H5064 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9 N/A N/A U6 3FLAG N/A
H9350 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9 N/A sfGFP U6 3FLAG N/A
H5066 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
H218 pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9 N/A mCherry CMV 3FLAG N/A
H5449 pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1 N/A mCherry CMV 3FLAG N/A
　　
 

應用實例

　　1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝臟]
　　
　　感染部位：肝臟
　　
　　載體名稱：Ad-CBS
　　
　　注射方式：尾靜脈
　　
　　注射量：1 x1011 PFU/mL，10ul
　　
　　檢測時間：7天
　　
　　2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝臟]
　　
　　感染部位：肝臟
　　
　　載體名稱：Ad-ATG7
　　
　　注射方式：尾靜脈
　　
　　注射量：1 x109 PFU /只
　　
　　檢測時間：10天
　　
　　3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]
　　
　　注射部位：大鼠大腦皮層
　　
　　載體名稱：Ad-FBLN
　　
　　注射方式：腦立體定位注射
　　
　　注射量：三種不同劑量
　　
　　檢測時間：7天
　　
　　尊龙凯时腺病毒的生產和質控採取了國際學術界公認的標準流程，採用AdEasy及Admax腺病毒包裝系統在HEK-293細胞中進行包裝。所獲得的病毒顆粒經過超速密度梯度離心和過濾，並通過殼蛋白免疫法進行滴度測定。一般情況下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml，完全可以滿足各類實驗的使用要求。

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