全國服務熱線400-151-5198      業務諮詢15800353038

　　螢光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細胞中不含內源性螢光素酶，一旦轉錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶。單報告基因實驗往往會受到各種實驗條件的影響，而雙報告基因則通過共轉染的“對照”作為內參為試驗提供一基準線，從而可以在最大程度上減小細胞活性和轉染效率等外在因素對實驗的影響，使得數據結果更為可信。Dual-Luciferase®雙螢光素酶報告基因檢測系統在細胞中同時表達螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶，兩者沒有種源同源性並對應不同的反應底物，故而沒有交叉干擾。得益於超強的光信號和超高的信噪比。

　　

　　 miRNA靶基因驗證

　　

　　miRNA主要通過作用於靶基因的3’UTR起作用（降解或抑制翻譯），將目的基因3’UTR（野生型和結合位點突變型）序列構建至載體中報告基因F-Luc的3’端，通過比較過表達miRNA後，報告基因表達的改變（螢光素酶的活性下降還是不變），來確定miRNA與靶基因3’UTR的作用位點。

　　

　　目的：驗證 miRNA與靶基因3’UTR 是否發生調控作用。

　　

　　材料：質粒pMIR-REPORT Luciferase基因3'UTR（Wt）；pMIR-REPORT Luciferase-基因3'UTR（Mut）；pRL-CMV（H321，Promega）；293T細胞株

　　

　　步驟：靶點預測——構建質粒——轉染細胞檢測——報告基因檢測（Luciferase活性檢測）——統計分析

　　

　　結果展示：

　　

　　 啟動子活性研究

　　

　　轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式因子，轉錄因子的DNA結合域和順式因子實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。

　　

　　轉錄因子主要通過作用於靶基因的啟動子起作用，將目的基因啟動子區序列替換報告基因F-Luc的啟動子，通過共表達轉錄因子後，報告基因表達的改變，來確定轉錄因子與靶基因啟動子結合位點及對靶基因的作用。

　　

　　目的：檢測轉錄因子對目的基因啟動子活性的影響

　　

　　材料：實驗質粒（pGL4.10-基因promotor）；對照質粒； pRL-CMV（E2261，Promega）；轉錄因子質粒；293T細胞株

　　

　　步驟：靶點預測——構建質粒——轉染細胞檢測——報告基因檢測（Luciferase活性檢測）——統計分析

　　

　　結果展示：

　　

　　客戶需提供信息：

　　

　　1 靶基因名稱

　　

　　2 靶基因種屬

　　

　　3 調控因子（miRNA或者轉錄因子）名稱

　　

　　提供給客戶：

　　

　　1 結合位點預測結果

　　

　　2 質粒及其構建報告

　　

　　3 雙熒光素酶檢測報告